domingo, 28 de junio de 2015

Stem Cells

TERAPIA GÉNICA: CIRROSIS

La terapia génica se ha desarrollado como un método de tratamiento de las enfermedades humanas basado en la transferencia de material genético a las células de un individuo. La finalidad es restablecer una función celular defectuosa. La terapia génica se basa en la combinación de tres elementos clave, el material genético a transferir, el método de transferencia y el tipo celular que incorporará dicho material genético.




La terapia génica en la cirrosis hepática está enfocada fundamentalmente a la prevención de la fibrogénesis, y la estimulación de la regeneración hepática. Muchas continúan en investigación en animales de prueba.
Regulación del factor de crecimiento transformante b (TGF-b).
La disminución de la actividad del TGF-b tiene como resultado una menor fibrosis.
Se puede bloquear específicamente su efecto haciendo que las células hepáticas expresen en su membrana una forma alterada del receptor del TGF-b que no sea capaz de trasmitir la señal intracelular tras su unión o disminuir su acción.
Envío específico a hígados cirróticos del gen del activador del plasminógeno urokinasa humano (huPA) modificado e insertado en el vector adenoviral (Ad-D huPA).


Activa mecanismos que inducen a la degradación del exceso de matriz extracelular y estimula la proliferación de hepatocitos. Reducción de la fibrosis, reducción en el número de células productoras de colágena, un incremento de MMP-2 y regulacion negativa de la expresión de genes de colágenas tipo I, III, IV y TIMP-1.
Aplicación del adenovirus recombinante AdMMP8, que contiene el gen MMP-8.
La metaloproteasa de matriz-8 (MMP-8) puede ser empleada para la degradación de exceso de colágena tipo I. Produciendo así la reversión de la fibrosis.

DISPONIBLE EN:


Terapia genica


USO DE CÉLULAS MADRE (STEM CELLS), EN CIRROSIS



La terapia celular y el uso de células madre para el tratamiento de las enfermedades hepáticas está todavía en una fase temprana de investigación. No obstante, la diversidad de células madre en cuanto a su origen, características y potencial de diferenciación abre un amplio abanico de posibilidades para el tratamiento de las enfermedades hepáticas. En este artículo se describen los principales tipos de células madre y su potencial para el tratamiento de las hepatopatías, así como las principales estrategias terapéuticas que se están explorando para el tratamiento de enfermedades hepáticas mediante terapia celular. Además, se recogen los principales estudios preclínicos y clínicos que indican que las células madre pueden llegar a ser una buena alternativa terapéutica en diferentes enfermedades hepáticas.

DISPONIBLE EN: 

https://medes.com/publication/70589

sábado, 20 de junio de 2015

Transgénico

EJEMPLO DE TRANSGÉNICO EN LA CIRROSIS
Arroz transgénico para la producción de albúmina humana

Las semillas de este arroz transgénico pueden producir cantidades substanciales de albúmina sérica humana (ASH)1.En todo el mundo la ASH tiene gran demanda, debido a su papel en la producción de medicamentos y vacunas, así como para usarse en el tratamiento de pacientes con quemaduras graves y otras condiciones clínicas como cirrosis hepática.



La proteína derivada del arroz ha mostrado tener funcionalidad equivalente a la de la albúmina humana, siendo idéntica desde el punto de vista fisicoquímico y en ratas ha mostrado tener la misma eficacia médica y reactividad inmune. En ratas con enfermedad hepática demostró ser igual de efectiva en la mejoría de los signos asociados a la cirrosis sin evidencia de una reacción inmune mayor que la observada en ratas que recibieron la versión proteica derivada del plasma.

DISPONIBLE EN:

http://www.pnas.org/content/108/47/19078.full

sábado, 13 de junio de 2015

ADN RECOMBINANTE (ARTIFICIAL)

USO DE ADN RECOMBINANTE PARA VACUNAS CONTRA EL VIRUS DE LA HEPATITIS


La infección por el virus de la hepatitis B (VHB) es causa de hepatitis crónica, la cirrosis hepática, el carcinoma hepático y la muerte.



La vacuna contra la Hepatitis B es una vacuna desarrollada para la prevención de una infección por hepatitis B. 



La vacuna contiene una de las proteínas de la envoltura del virus de la hepatitis B, el antígeno de superficie de la hepatitis B. Lo que se espera lograr es que el sistema inmunitario pueda crear anticuerpos contra el virus de la hepatitis y se hayan establecido en la circulación sanguínea, para de esta manera adquirir memoria inmunitaria en contra de la hepatitis B.



Las vacunas en el presente se fabrican usando ADN recombinante. Las vacunas de ADN recombinado consisten en proteínas producidas por cultivos de levaduras modificadas geneticamente.




A diferencia de las vacunas derivadas del plasma humano, las vacunas por recombinación de ADN no se producen con el uso de células humanas o material proveniente de tejidos animales.

Disponible en:

http://www.scielo.org.pe/scielo.php?pid=S1022-51292003000400004&script=sci_arttext


ADN Recombinante

ADN RECOMBINANTE EN LA NATURALEZA


El ADN recombinante que no se obtiene a partir de técnicas moleculares desarrolladas en laboratorios se conoce como:



RECOMBINACIÓN GENÉTICA





Es un proceso biológico que se produce normalmente en todos los organismos, tras el cual se produce un cambio del genoma  y se verifica normalmente con la rotura y la reunión del ADN. Hoy en día es posible crear moléculas recombinantes entre segmentos de ADN que no presentan homología y que pueden proceder de organismos diversos. Con el uso coordinado de las enzimas de restricción y de los vectores moleculares, es posible aislar una secuencia de ADN de cualquier organismo e insertarla en el ADN de otro; a estas formas vivas que han sufrido tal transformación y que contienen un ADN extraño se las denomina transgénicas.

Conversión Génica



Es la segregación asimétrica de los Genes durante la replicación que conduce a la producción de cadenas recombinantes no recíprocas y la aparente conversión de un alelo en otro. Por tanto los productos meióticos de un individuo Aa pueden ser AAAa o aaaA en lugar de AAaa; esto quiere decir que el alelo A se ha convertido en el alelo a o viceversa.

Disponible en:

http://www.ivu.org/spanish/trans/ssnv-genetic.html
http://www.unav.es/ocw/genetica/tema3-2.html

domingo, 7 de junio de 2015

Wetern Blot - Técnica de Hibridación

TÉCNICAS DE HIBRIDACIÓN PARA CIRROSIS
Western blot


Se separó el antígeno en sus diferentes componentes proteicos de acuerdo al peso molecular por electroforesis en gel de poliacrilamida-SDS al 15%. Luego las proteínas fueron transferidas por electroforesis sobre un papel de nitrocelulosa, donde fue enfrentado con muestras de sueros a la dilución de 1/20 para detectar IgG específico contra el antígeno (E/S) de Fasciola hepatica. Se usó la enzima peroxidasa conjugada con anti-IgG humano a una dilución de 1/1000 para localizar el antígeno anticuerpo. Se determinó el peso molecular de fracciones proteicas del antígeno usando estándares preteñidos comerciales de bajo peso molecular de 3 a 43KD.



Se consideró seropositiva la prueba de Western blot cuando en el suero se determinó la presencia de IgG específica contra las proteínas de bajo peso molecular de 14 a 27 KDa del antígeno crudo (E/S) de Fasciola hepática, fracciones que han sido consideradas por varios autores con alta sensibilidad y especificidad.

Disponible en: 

http://www.scielo.org.pe/pdf/rmh/v13n2/v13n2ao3.pdf 

domingo, 31 de mayo de 2015

Análisis de la PCR en Hepatitis C crónica

CIRROSIS (ANALISIS DE LA PCR)

El análisis de la PCR se realizó en 24 pacientes con Hepatitis C Crónica, utilizando criterios de inclusión como: presencia de ARN-VHC en sangre diagnosticada por ELISA) y confirmada por Reacción en Cadena de la Polimerasa (RCP).



TOMA DE LA MUESTRA: 5 ml de saliva no estimulada fue obtenida de cada uno de los pacientes escupiendo directamente dentro del tubo y mantenidas a -70°C hasta el momento de su procesamiento.

TRANSCRIPCIÓN REVERSA Y REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA (RCP): El ARN fué extraído de la saliva usando precipitación con cloroformo-isopropanol. El cADN fue sintetizado por transcripción reversa en una mezcla que contenía el ácido nucleico, 500µl de inhibidor de ARNasa, 50 µM de cada dNTP, 5 pmol del primer CA: CAACACTACTCGGCTAGCAGT (nucleótidos 229-329) (26), 4µl de buffer de transcripción reversa (BRL) y 20 U de transcriptasa reversa M-MLV (BRL).
Posteriormente se realizó la RCP con 10 µl de esta muestra en una solución que contenía 50 mM KCl, 10 mM Tris HCl pH 8,3, 2mM Mgcl2, 200µM de cada dNTP (dATP, dCTP, dGTP, dUTP), 10 pmol de los iniciadores C3: GGC-GACACTCCACCATAGAT (nucleótidos 1-20) (26) y C4. Se realizaron 35 ciclos (90 seg, 94°C/2min, 40°C/2min, 68°C) en un termociclador , usando 2 U Taq polimerasa. El producto final amplificado, fue separado por electroforesis en geles de agarosa al 2%, y coloreados con bromuro de etidio para su visualización bajo luz ultravioleta, para apreciar las bandas correspondientes.



De las muestras analizadas por TR-RCP, se obtuvo que de las 24 muestras de saliva estudiadas, 7/24 (29%) fueron positivas para la presencia del genoma viral, mientras que 17/24 (71%) fueron negativas. Con respecto a la edad se detectó a 7 pacientes con genoma de VHC, el 57 (4/7) se ubicó en el rango de edad entre 34-55 años, seguido por el 43% (3//) entre 56-67 años. Referente al sexo, del total de los pacientes a los que se les detectó la presencia del genoma viral, 71% (5/7) pertenecían al género masculino, y el 29% (2/) al género femenino, en contraste con los pacientes negativos para el agente viral, de los cuales, el 41% ( 7/17) fueron del género masculino, y el resto, 59% (10/17) al femenino.

Disponible en: