domingo, 28 de junio de 2015

Stem Cells

TERAPIA GÉNICA: CIRROSIS

La terapia génica se ha desarrollado como un método de tratamiento de las enfermedades humanas basado en la transferencia de material genético a las células de un individuo. La finalidad es restablecer una función celular defectuosa. La terapia génica se basa en la combinación de tres elementos clave, el material genético a transferir, el método de transferencia y el tipo celular que incorporará dicho material genético.




La terapia génica en la cirrosis hepática está enfocada fundamentalmente a la prevención de la fibrogénesis, y la estimulación de la regeneración hepática. Muchas continúan en investigación en animales de prueba.
Regulación del factor de crecimiento transformante b (TGF-b).
La disminución de la actividad del TGF-b tiene como resultado una menor fibrosis.
Se puede bloquear específicamente su efecto haciendo que las células hepáticas expresen en su membrana una forma alterada del receptor del TGF-b que no sea capaz de trasmitir la señal intracelular tras su unión o disminuir su acción.
Envío específico a hígados cirróticos del gen del activador del plasminógeno urokinasa humano (huPA) modificado e insertado en el vector adenoviral (Ad-D huPA).


Activa mecanismos que inducen a la degradación del exceso de matriz extracelular y estimula la proliferación de hepatocitos. Reducción de la fibrosis, reducción en el número de células productoras de colágena, un incremento de MMP-2 y regulacion negativa de la expresión de genes de colágenas tipo I, III, IV y TIMP-1.
Aplicación del adenovirus recombinante AdMMP8, que contiene el gen MMP-8.
La metaloproteasa de matriz-8 (MMP-8) puede ser empleada para la degradación de exceso de colágena tipo I. Produciendo así la reversión de la fibrosis.

DISPONIBLE EN:


Terapia genica


USO DE CÉLULAS MADRE (STEM CELLS), EN CIRROSIS



La terapia celular y el uso de células madre para el tratamiento de las enfermedades hepáticas está todavía en una fase temprana de investigación. No obstante, la diversidad de células madre en cuanto a su origen, características y potencial de diferenciación abre un amplio abanico de posibilidades para el tratamiento de las enfermedades hepáticas. En este artículo se describen los principales tipos de células madre y su potencial para el tratamiento de las hepatopatías, así como las principales estrategias terapéuticas que se están explorando para el tratamiento de enfermedades hepáticas mediante terapia celular. Además, se recogen los principales estudios preclínicos y clínicos que indican que las células madre pueden llegar a ser una buena alternativa terapéutica en diferentes enfermedades hepáticas.

DISPONIBLE EN: 

https://medes.com/publication/70589

sábado, 20 de junio de 2015

Transgénico

EJEMPLO DE TRANSGÉNICO EN LA CIRROSIS
Arroz transgénico para la producción de albúmina humana

Las semillas de este arroz transgénico pueden producir cantidades substanciales de albúmina sérica humana (ASH)1.En todo el mundo la ASH tiene gran demanda, debido a su papel en la producción de medicamentos y vacunas, así como para usarse en el tratamiento de pacientes con quemaduras graves y otras condiciones clínicas como cirrosis hepática.



La proteína derivada del arroz ha mostrado tener funcionalidad equivalente a la de la albúmina humana, siendo idéntica desde el punto de vista fisicoquímico y en ratas ha mostrado tener la misma eficacia médica y reactividad inmune. En ratas con enfermedad hepática demostró ser igual de efectiva en la mejoría de los signos asociados a la cirrosis sin evidencia de una reacción inmune mayor que la observada en ratas que recibieron la versión proteica derivada del plasma.

DISPONIBLE EN:

http://www.pnas.org/content/108/47/19078.full

sábado, 13 de junio de 2015

ADN RECOMBINANTE (ARTIFICIAL)

USO DE ADN RECOMBINANTE PARA VACUNAS CONTRA EL VIRUS DE LA HEPATITIS


La infección por el virus de la hepatitis B (VHB) es causa de hepatitis crónica, la cirrosis hepática, el carcinoma hepático y la muerte.



La vacuna contra la Hepatitis B es una vacuna desarrollada para la prevención de una infección por hepatitis B. 



La vacuna contiene una de las proteínas de la envoltura del virus de la hepatitis B, el antígeno de superficie de la hepatitis B. Lo que se espera lograr es que el sistema inmunitario pueda crear anticuerpos contra el virus de la hepatitis y se hayan establecido en la circulación sanguínea, para de esta manera adquirir memoria inmunitaria en contra de la hepatitis B.



Las vacunas en el presente se fabrican usando ADN recombinante. Las vacunas de ADN recombinado consisten en proteínas producidas por cultivos de levaduras modificadas geneticamente.




A diferencia de las vacunas derivadas del plasma humano, las vacunas por recombinación de ADN no se producen con el uso de células humanas o material proveniente de tejidos animales.

Disponible en:

http://www.scielo.org.pe/scielo.php?pid=S1022-51292003000400004&script=sci_arttext


ADN Recombinante

ADN RECOMBINANTE EN LA NATURALEZA


El ADN recombinante que no se obtiene a partir de técnicas moleculares desarrolladas en laboratorios se conoce como:



RECOMBINACIÓN GENÉTICA





Es un proceso biológico que se produce normalmente en todos los organismos, tras el cual se produce un cambio del genoma  y se verifica normalmente con la rotura y la reunión del ADN. Hoy en día es posible crear moléculas recombinantes entre segmentos de ADN que no presentan homología y que pueden proceder de organismos diversos. Con el uso coordinado de las enzimas de restricción y de los vectores moleculares, es posible aislar una secuencia de ADN de cualquier organismo e insertarla en el ADN de otro; a estas formas vivas que han sufrido tal transformación y que contienen un ADN extraño se las denomina transgénicas.

Conversión Génica



Es la segregación asimétrica de los Genes durante la replicación que conduce a la producción de cadenas recombinantes no recíprocas y la aparente conversión de un alelo en otro. Por tanto los productos meióticos de un individuo Aa pueden ser AAAa o aaaA en lugar de AAaa; esto quiere decir que el alelo A se ha convertido en el alelo a o viceversa.

Disponible en:

http://www.ivu.org/spanish/trans/ssnv-genetic.html
http://www.unav.es/ocw/genetica/tema3-2.html

domingo, 7 de junio de 2015

Wetern Blot - Técnica de Hibridación

TÉCNICAS DE HIBRIDACIÓN PARA CIRROSIS
Western blot


Se separó el antígeno en sus diferentes componentes proteicos de acuerdo al peso molecular por electroforesis en gel de poliacrilamida-SDS al 15%. Luego las proteínas fueron transferidas por electroforesis sobre un papel de nitrocelulosa, donde fue enfrentado con muestras de sueros a la dilución de 1/20 para detectar IgG específico contra el antígeno (E/S) de Fasciola hepatica. Se usó la enzima peroxidasa conjugada con anti-IgG humano a una dilución de 1/1000 para localizar el antígeno anticuerpo. Se determinó el peso molecular de fracciones proteicas del antígeno usando estándares preteñidos comerciales de bajo peso molecular de 3 a 43KD.



Se consideró seropositiva la prueba de Western blot cuando en el suero se determinó la presencia de IgG específica contra las proteínas de bajo peso molecular de 14 a 27 KDa del antígeno crudo (E/S) de Fasciola hepática, fracciones que han sido consideradas por varios autores con alta sensibilidad y especificidad.

Disponible en: 

http://www.scielo.org.pe/pdf/rmh/v13n2/v13n2ao3.pdf 

domingo, 31 de mayo de 2015

Análisis de la PCR en Hepatitis C crónica

CIRROSIS (ANALISIS DE LA PCR)

El análisis de la PCR se realizó en 24 pacientes con Hepatitis C Crónica, utilizando criterios de inclusión como: presencia de ARN-VHC en sangre diagnosticada por ELISA) y confirmada por Reacción en Cadena de la Polimerasa (RCP).



TOMA DE LA MUESTRA: 5 ml de saliva no estimulada fue obtenida de cada uno de los pacientes escupiendo directamente dentro del tubo y mantenidas a -70°C hasta el momento de su procesamiento.

TRANSCRIPCIÓN REVERSA Y REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA (RCP): El ARN fué extraído de la saliva usando precipitación con cloroformo-isopropanol. El cADN fue sintetizado por transcripción reversa en una mezcla que contenía el ácido nucleico, 500µl de inhibidor de ARNasa, 50 µM de cada dNTP, 5 pmol del primer CA: CAACACTACTCGGCTAGCAGT (nucleótidos 229-329) (26), 4µl de buffer de transcripción reversa (BRL) y 20 U de transcriptasa reversa M-MLV (BRL).
Posteriormente se realizó la RCP con 10 µl de esta muestra en una solución que contenía 50 mM KCl, 10 mM Tris HCl pH 8,3, 2mM Mgcl2, 200µM de cada dNTP (dATP, dCTP, dGTP, dUTP), 10 pmol de los iniciadores C3: GGC-GACACTCCACCATAGAT (nucleótidos 1-20) (26) y C4. Se realizaron 35 ciclos (90 seg, 94°C/2min, 40°C/2min, 68°C) en un termociclador , usando 2 U Taq polimerasa. El producto final amplificado, fue separado por electroforesis en geles de agarosa al 2%, y coloreados con bromuro de etidio para su visualización bajo luz ultravioleta, para apreciar las bandas correspondientes.



De las muestras analizadas por TR-RCP, se obtuvo que de las 24 muestras de saliva estudiadas, 7/24 (29%) fueron positivas para la presencia del genoma viral, mientras que 17/24 (71%) fueron negativas. Con respecto a la edad se detectó a 7 pacientes con genoma de VHC, el 57 (4/7) se ubicó en el rango de edad entre 34-55 años, seguido por el 43% (3//) entre 56-67 años. Referente al sexo, del total de los pacientes a los que se les detectó la presencia del genoma viral, 71% (5/7) pertenecían al género masculino, y el 29% (2/) al género femenino, en contraste con los pacientes negativos para el agente viral, de los cuales, el 41% ( 7/17) fueron del género masculino, y el resto, 59% (10/17) al femenino.

Disponible en: 

domingo, 24 de mayo de 2015

Tenicas Moleculares

USO DE PCR EN LA CIRROSIS HEPÁTICA


El presente artículo tiene por título "Detección de ARN de virus hepatitis C en la saliva de un grupo de pacientes con hepatitis C crónica". En el artículo se usa como método de análisis la Reacción en Cadena de la Polimerasa por Transcripción Inversa (RT-PCR) para identificar el ARN del virus. Así se identificará el causante de hepatitis que posteriormente puede desarrollar el cuadro crónico y así producir Cirrosis Hepática. Una de las principales causas de Cirrosis son las hepatitis y aún más cuando se vuelven crónicas.
El PCR nos permite una rápida identificación por su utilidad a través de la amplificación;resulta mucho más fácil identificar con una muy alta  probabilidad virus o bacterias causantes de una enfermedad.



DISPONIBLE EN:

http://www.scielo.org.ve/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0001-63652008000300006&lang=pt

domingo, 17 de mayo de 2015

TRADUCCION - CIRROSIS

ALTERACIONES EN LA TRADUCCIÓN PARA CIRROSIS HEPÁTICA



La traducción es un proceso en el cual la información del ARN-m se transforma a proteínas, está basado en la "leída" del ARNm que fue producido por medio del proceso de la transcripción. Cualquier cambio en el ADN que codifica un gen producirá una alteración del ARNm que es producido. Desde luego, el ARNm alterado puede conllevar a la producción de una proteína que ya no funciona como debe ser. El cambio de un solo nucleótido en el ADN de un gen puede producir una proteína que no funciona para nada.




En el hígado las células estelares se encuentran en el espacio de Disse y contienen gran cantidad de vitamina A, debido al daño hepático estas células proliferan inducidas  por la secreción autocrina y paracrina de citocinas tales como: el factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF) y el factor de crecimiento transformante β tipo 1 (TGF-β1); pierden su capacidad de almacenamiento de vitamina A; esto acasiona una transformación fenotípica a miofibroblastos , los cuales producen una gran cantidad de proteínas colagenosas y no colagenosas , acumulo de laminina α-1, tenascina y fibronectina. El hígado cirrótico tiene seis veces mas proteínas en la matriz extracelular que el hígado normal.


Los eventos moleculares encontrados en la cirrosis hepática implican: acumulo de laminina α-1, tenascina y fibronectina, con la sucesiva activación y proliferación de células estelares hepáticas (HSC) inducida mediante la secreción autocrina y paracrina de citocinas tales como: el factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF) y el factor de crecimiento transformante β tipo 1 (TGF-β1). Las HSC activadas (HSCa) conducen a un incremento en los depósitos de proteínas de matriz extracelular (MEC), fundamentalmente colágenas tipo I, III y IV en el espacio perisinusoi-dal o «de Disse», lo que dificulta el intercambio de substancias entre el sinusoide y los hepatocitos.

La activación de las HSC presentes en el espacio subendotelial (espacio de Disse) que inducen una exacerbada expresión de proteínas fibrilares (principalmente colágena tipo I, III y VI) y una disminución en la actividad de enzimas (conocidas como metaloproteasas) que degradan dichas proteínas colagénicas, ocasionan una alteración en el intercambio de sustancias entre el sinusoide y los hepatoci-tos para ser metabolizadas son sólo algunos de los mecanismos involucrados durante el desarrollo de la cirrosis en el hígado.
En el daño temprano se acumulan: fibronectina, colágenas tipo III y V; mientras que en el daño crónico hay incremento de colágenas I y IV, undulina, elastina y laminina.
Con el daño progresivo estas proteínas interaccionan  con las estructuras vasculares, produciendo una estructura anormal en forma de nódulos (característico de la cirrosis)

Las MMPs (metaloproteinas de la matriz) son las causantes del aumento de tejido fibrótico.


Disponible en:

http://apps.elsevier.es/watermark/ctl_servlet?_f=10&pident_articulo=90224321&pident_usuario=0&pcontactid=&pident_revista=288&ty=104&accion=L&origen=gastromexico%20&web=www.revistagastroenterologiamexico.org/&lan=es&fichero=08vol68nums2.pdf


domingo, 10 de mayo de 2015

TRANSCRIPCIÓN - CIRROSIS

ALTERACIONES EN LA TRANSCRIPCIÓN DEL ADN

   El polimorfismo del gen PNPLA3 confiere mayor riesgo de

 cirrosis y daño en el hígado en la enfermedad hepática por alcohol

Se sabe que el análisis del gen humano PNPLA3 puede predecir la posible gravedad de la enfermedad del hígado graso. Además, se ha demostrado que el análisis del gen PNPLA3 predice también la posible gravedad de la enfermedad del hígado causada por alcohol en mestizos mejicanos. En octubre se ha publicado en el Journal of Hepatology un estudio en el que se determinaba si el análisis del PNPLA3 es también de utilidad en pacientes europeos caucasianos con enfermedad hepática por alcohol.
Incluyeron 328 personas sanas y 330 pacientes (entre ellos 265 con cirrosis) y se les analizó en sangre el gen PNPLA3. Este análisis puede dar tres resultados: C-C, C-G y G-G. Comprobaron que el alelo G se detectaba más frecuentemente en los pacientes que en los controles sanos y esto se asociaba con una mayor cantidad de grasa en el hígado, con fibrosis y cirrosis hepática. En el estudio estadístico se comprobó que el polimorfismo del gen PNPLA3 es el mejor factor predictivo de la evolución de la enfermedad.
En conclusión, el análisis del gen PNPLA3 es de gran utilidad para predecir la evolución de la enfermedad de hígado causada por alcohol e incluso, para decidir la frecuencia e intensidad del control clínico al que debe someterse el paciente.

domingo, 3 de mayo de 2015

EPIGENETICA EN LA CIRROSIS

EPIGENETICA EN LA CIRROSIS

Las opciones mas actuales sobre epigenetica proporcionan una descripción centrada en 3 sistemas de regulación:

ADN (CPG; principal diana de la metilacion).

Modificaciones postraduccionales de las histonas.

MicroRNAs (miRNAs).





La metilación del ADN y el cáncer hepatocelular (HCC) 

Lesiones epigenéticas típicas en el cáncer de hígado incluyen cambios en el genoma, la metilación del ADN, ADN-hipermetilación loci específicos, disfunción de enzimas modificadoras de histonas y la expresión anormal de ncRNAs. Existen patrones de metilación de ADN específicos para el cáncer de hígado. En la metilación del ADN en el cáncer hepatocelular humano se identifica 230 genes cuyos promotores eran hipometilados y había elevado expresión en HCC (epigenéticamente inducida), y 322 genes que fueron hipermetilados en tumores (epigenéticamente reprimidos).

Genes epigenéticamente inducidos fueron asignadas a las vías de conducción de la diferenciación celular y la transformación, el crecimiento tumoral y la metástasis.


Genes reprimidos asignan a la apoptosis, la adhesión celular y la progresión del ciclo celular.







Un estudio de los virus de hepatitis B (VHB), inducida por HCC se compara con la metilación del ADN entre el tumor y el tejido adyacente, este identificó 1640 hipometilados y 684 hipermetilados en el tumor. En un estudio más enfocado, se identificaron los genes supresores de tumores que se hipermetilan en las primeras etapas del HCC (HIC1, GSTP1, SOCS1, RASSF1, CDKN2A, APC, RUNX3 y PRDM2).

El cáncer hepatocelular es un cáncer de hígado que constituye el 80-90% de los tumores hepáticos malignos primarios, cuya causa principal es la cirrosis hepática.





DISPONIBLE EN:
http://zl.elsevier.es/es/revista/gastroenterologia-hepatologia-14/biologia-celular-genetica-cancer-higado-13107573-progresos-hepatologia-2007

http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/hep.27131/full

domingo, 26 de abril de 2015

El Acortamiento Temprano de los Telómeros en la Replicación


En cada Replicación del ADN, el tamaño de los Telómeros se acorta debido a las repetidas divisiones de las cadenas de ADN, para lograr este proceso; esto es parte del envejecimiento celular.

Sin embargo el acortamiento temprano de los Telómeros disminuye drásticamente de tan solo la pérdida normal de 20 pb a entre 50 - 100 pb. Como consecuencia obtenemos algunas alteraciones, entre aquellas la Cirrosis Hepática.

domingo, 19 de abril de 2015

Cirrosis Hepática

Cirrosis


Es la cicatrización y el funcionamiento deficiente del hígado. Es la última fase de la enfermedad hepática crónica.

Causas

La cirrosis es el resultado final del daño crónico al hígado causado por hepatopatía crónica. Las causas comunes de la enfermedad hepática crónica en los Estados Unidos son:

  -  Infección por hepatitis B o C
    -  Alcoholismo

Las causas menos comunes de cirrosis pueden ser:

    Hepatitis autoinmunitaria
     Trastornos en las vías biliares
      Algunos medicamentos
     Enfermedades hereditarias
      Otras enfermedades hepáticas como esteatosis hepática no alcohólica (EHNA) y esteatohepatitis       no alcohólica (EHNA)

Síntomas

Es posible que no haya síntomas o que se presenten lentamente, según qué tan bien esté funcionando el hígado.


Los síntomas iniciales abarcan:

  - Fatiga y desaliento
  - Inapetencia y pérdida de peso
  -   Náuseas o dolor abdominal
  - Vasos sanguíneos pequeños, rojos y aracniformes en la piel

  A medida que el funcionamiento del hígado empeora, los síntomas pueden abarcar:

    -   Acumulación de líquido en las piernas (edema) y en el abdomen (ascitis)
    - Coloración amarillenta en la piel, las membranas mucosas o los ojos (ictericia)
    - Enrojecimiento de las palmas de las manos
    -  En los hombres, impotencia, encogimiento de los testículos e hinchazón de las mamas
    - Tendencia a la formación de hematomas y sangrado anormal
    -   Confusión o problemas para pensar
     -  Heces de color pálido o color arcilla
  
    Pruebas y exámenes

El médico hará un examen físico para buscar:

  Hepatomegalia y esplenomegalia
    Tejido mamario excesivo
   Abdomen hinchado como resultado de la presencia de demasiado líquido
  Palmas enrojecidas
  Vasos sanguíneos rojos en la piel en forma de araña
  Testículos pequeños
  Venas de la pared abdominal dilatadas
  Ojos o piel amarilla (ictericia)

  Le pueden hacer los siguientes exámenes para medir el funcionamiento del hígado:

     Conteo sanguíneo completo
    Tiempo de protrombina
    Pruebas de la función hepática
   Nivel de albúmina en la sangre